DNA测序原理

 在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger（1977）发明的双脱氧核糖核酸链末端终止法目前Sanger测序法得到了广泛的应用。Sanger法是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，并且在每个碱基后面进行萤光标记，产生以A、T、C、G结束的四组不同长度的一系列核苷酸，然后再尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而获得可见的DNA碱基序列。Sanger法测序的原理就是，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸（dNTP）使之扩增，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）使之终止。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3‘-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止，终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddntps的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几个至千以上个，相差一个碱基一系列片度。他们具有共同的起始点，但终止在不同的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。